美國應(yīng)用DNA科學(xué)公司（Applied DNA Sciences,Inc.）近日宣布，旗下專注于下一代生物治療的公司LineaRx通過其專有的非病毒、無質(zhì)粒（non-viral plasmid-free，NVPF）制造平臺在人類T細(xì)胞實現(xiàn)了抗CD19-CAR（嵌合抗原受體）的表達(dá)。據(jù)該公司稱，這一重大事件代表了利用經(jīng)由可擴(kuò)展聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）制造過程產(chǎn)生的線性DNA設(shè)計的基因構(gòu)建首次在人類T細(xì)胞表達(dá)抗CD19抗體。該公司認(rèn)為，該技術(shù)將成為目前使用病毒遞送平臺的所有基因療法的一個重要選擇，尤其是使用病毒遞送合成基因來重定向患者T細(xì)胞的腫瘤免疫療法，即所謂的CAR-T療法。

Linearx公司獨特的基于PCR的制造技術(shù)創(chuàng)造了編碼抗CD19接合器的線性DNA擴(kuò)增子，然后將該DNA構(gòu)建體在體外通過電穿孔技術(shù)遞送至人類T細(xì)胞。隨后的測試證實，這些工程化T細(xì)胞實現(xiàn)了抗CD19 CAR的表達(dá)。盡管這些初步數(shù)據(jù)令人鼓舞，但總體表達(dá)水平較低，目前Linearx公司正在繼續(xù)使用正在申請專利的高表達(dá)擴(kuò)增子技術(shù)（HEA）和除電穿孔外的轉(zhuǎn)染方法來產(chǎn)生較高的轉(zhuǎn)染水平，并將在之后報告這一重大成果的進(jìn)一步進(jìn)展。

應(yīng)用DNA科學(xué)公司總裁兼首席執(zhí)行官James A.Hayward博士表示，“我們的目標(biāo)有三個方面：1）確定PCR生產(chǎn)的線性DNA作為一個平臺用于快速設(shè)計和生產(chǎn)治療性核酸構(gòu)建體的價值，包括床旁（POC）應(yīng)用；2）證明NVPF生產(chǎn)流程改善的安全性和治療價值，該流程不同于目前全行業(yè)基于病毒的生產(chǎn)流程；3）與未來的合作伙伴一起，將我們開發(fā)的基于NVPF的抗CD19 CAR-T細(xì)胞療法推進(jìn)臨床。

PCR產(chǎn)生的GFP基因片段在人類T細(xì)胞中的表達(dá)

這項成果建立在2018年底通過LineaRx公司PCR技術(shù)生產(chǎn)、設(shè)計、制造的線性DNA擴(kuò)增子在工程化人類T細(xì)胞的第一個實例基礎(chǔ)上。該實例首次證明了一種包含可編碼綠色熒光蛋白（GFP）完整基因的線性DNA擴(kuò)增子。如上圖所示，通過高通量電穿孔技術(shù)，PCR產(chǎn)生的GFP基因片段在數(shù)百個人類T細(xì)胞中被攝入及隨后表達(dá)，形成了綠色熒光細(xì)胞群。

2018年10月，Linearx公司宣布與Icell Gene Therapeutics簽署了一項針對抗CD19 CAR-T療法的北美獨家許可和研究服務(wù)協(xié)議。結(jié)合Applied DNA公司在大規(guī)模PCR生產(chǎn)和DNA化學(xué)修飾方面的專業(yè)知識，該公司將利用其NVPF平臺開發(fā)和生產(chǎn)表達(dá)載體用于多款CAR-T療法，包括LinCART19，這是一款非病毒、無質(zhì)粒的抗CD19 CAR-T候選藥物。

正如2018年12月Linearrx公司在分析師日所討論的那樣，在中國開展的一項臨床試驗中，LinCART19所基于的CAR-T基因構(gòu)建體在單次低劑量治療后6個月，所有3例急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）患者均實現(xiàn)完全緩解。雖然這些有希望的臨床結(jié)果為所使用的基因構(gòu)建體提供了價值證據(jù)，但CAR-T細(xì)胞是通過病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染的。LinCART19將使用線性DNA，并通過電穿孔、增溶或其他方式導(dǎo)入T細(xì)胞，其所針對的CD19是幾乎所有B細(xì)胞惡性腫瘤中表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白，這也是目前已上市的兩款CAR-T療法的靶點。

在不使用病毒載體或質(zhì)粒的情況下，Linearx公司的NVPF制造平臺比現(xiàn)有的基于病毒/質(zhì)粒的CAR-T方法具有許多潛在的優(yōu)勢包括：1）簡化的制造流程將降低成本和交付周期；2）降低永久性遺傳整合/重組進(jìn)入靶細(xì)胞的風(fēng)險，降低插入誘變的風(fēng)險；3）細(xì)胞因子風(fēng)暴治療副作用的潛在緩解；4）靶向新抗原的最終能力足以快速影響患者；5）避免復(fù)雜和繁瑣的分布式供應(yīng)鏈，加速治療。

Linearx公司認(rèn)為，NVPF方法能夠生成重要的生物治療藥物，有望重新定義“床旁”治療，為患者提供更快速、更有效、更經(jīng)濟(jì)和更安全的基因治療，將個性化癌癥療法從夢想變?yōu)楝F(xiàn)實。（新浪醫(yī)藥編譯/newborn）

文章參考來源：

1、Applied DNA Subsidiary LineaRx Achieves Biotech Industry First with Anti-CD19 Expression in Human CAR T Cells via Proprietary Non-Viral, Plasmid-Free Platform

2、https://adnas.com/certaint-supply-chain-platform/