今日，Broad研究所的著名學(xué)者張鋒教授和合作伙伴一起，公布了他們進(jìn)一步改良的基于CRISPR技術(shù)的新冠病毒簡(jiǎn)易檢測(cè)流程。這一流程被稱為STOPCovid.V2，此前，張鋒團(tuán)隊(duì)和其合作伙伴已經(jīng)公布了稱為STOPCovid的簡(jiǎn)易新冠病毒檢測(cè)流程，這一流程不需要從患者樣本中純化RNA，并且將檢測(cè)新冠病毒所需的化學(xué)反應(yīng)步驟在一個(gè)試管中完成。

2.0版的STOPCovid在原有檢測(cè)的基礎(chǔ)上更進(jìn)一步，在樣本制備的過(guò)程中通過(guò)加入磁珠富集樣本中的RNA，從而通過(guò)提高PCR反應(yīng)的起始RNA數(shù)量，進(jìn)一步提高了STOPCovid.V2的檢測(cè)靈敏度。

在最初的STOPCovid檢測(cè)流程中，張鋒團(tuán)隊(duì)將擴(kuò)增RNA數(shù)目的等溫PCR步驟和使用Cas酶檢測(cè)新冠病毒特定序列的化學(xué)反應(yīng)合并在同一個(gè)試管中進(jìn)行。這一檢測(cè)步驟不需要復(fù)雜儀器，只需要在60攝氏度的恒溫反應(yīng)，就可以通過(guò)側(cè)流試紙讀出檢測(cè)結(jié)果。然而，在進(jìn)一步檢測(cè)中，研究人員發(fā)現(xiàn)，這一簡(jiǎn)易版流程只能發(fā)現(xiàn)60.5%傳統(tǒng)RT-PCR檢測(cè)出的陽(yáng)性患者。

為了提高檢測(cè)的靈敏度，STOPCovid.v2的流程中加入了通過(guò)磁珠富集鼻咽拭子中新冠病毒RNA的步驟，使用普通實(shí)驗(yàn)室中用于富集RNA的磁珠，研究人員可以收集鼻咽拭子中包含的所有病毒RNA作為反應(yīng)的起始材料，而且研究人員同時(shí)精簡(jiǎn)了磁珠富集RNA的操作步驟，去除了乙醇清洗和洗脫過(guò)程，讓整個(gè)RNA富集過(guò)程不超過(guò)15分鐘。

▲STOPCovid.V2的操作流程（圖片來(lái)源：參考資料[1]）

在華盛頓大學(xué)進(jìn)行的一項(xiàng)設(shè)盲檢測(cè)中，研究人員檢測(cè)了STOPCovid.V2檢驗(yàn)202個(gè)新冠病毒陽(yáng)性和200個(gè)新冠病毒陰性鼻咽拭子樣本的結(jié)果。研究人員發(fā)現(xiàn)，STOPCovid.V2能夠達(dá)到93.1%的靈敏度和98.5%的特異性。陽(yáng)性樣本只需15-45分鐘就能獲得結(jié)果。

▲STOPCovid.V2的檢測(cè)結(jié)果，B：新冠病毒陽(yáng)性樣本；C：新冠病毒陰性樣本，紅色虛線為判斷樣本為陽(yáng)性還是陰性的閾值（圖片來(lái)源：參考資料[1]）

研究人員在文章中表示，這一簡(jiǎn)化版的STOPCovid.V2流程適于沒(méi)有復(fù)雜儀器的臨床實(shí)驗(yàn)室使用。同時(shí)，研究人員還開發(fā)了一款智能手機(jī)APP，幫助檢測(cè)人員對(duì)側(cè)流試紙的結(jié)果進(jìn)行解讀。

參考資料：

[1] Joung et al, (2020). Detection of SARS-CoV-2 with SHERLOCK One-Pot Testing. NEJM, DOI: 10.1056/NEJMc2026172